ATP7A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419259

Visão geral

Atp7a codifica a ATP7A, uma ATPase do tipo P transportadora de cobre que regula a distribuição intracelular de cobre ao alternar entre a rede trans-Golgi e a membrana plasmática em resposta aos níveis de cobre. Ao fornecer cobre a enzimas da via secretória e promover o efluxo de cobre, a ATP7A sustenta processos dependentes de cobre, incluindo o controle do estresse oxidativo, a formação de ligações cruzadas na matriz extracelular e a homeostase do ferro por meio da maturação de cuproenzimas. A atividade da ATP7A intersecciona com o tráfego vesicular, a homeostase de íons metálicos e vias de sinalização redox, e sua disfunção perturba o equilíbrio sistêmico e celular do cobre. Em modelos murinos, a função alterada de Atp7a é usada para estudar mecanismos de fenótipos de neurodesenvolvimento e de tecido conjuntivo dependentes de cobre e respostas mais amplas ao estresse metabólico.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ATP7A (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Atp7a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Atp7a, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Atp7a na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ATP7A.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Atp7a para a investigação da sinalização de ATP7A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Atp7a críticos para a função ATP7A
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Atp7a para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ATP7A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo ATP7A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Atp7a. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ATP7A Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR ATP7A (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Atp7a para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Atp7a definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.