Plasmide Double Nickase (m) ATP5B: sc-419247-NIC

Atp5b code la sous-unité β de l’ATP synthase mitochondriale (ATP5B), un composant central du complexe V de la phosphorylation oxydative, qui catalyse la production d’ATP à partir de l’ADP et du phosphate inorganique. ATP5B participe à la conversion énergétique couplée au flux de protons à travers la membrane interne mitochondriale et contribue au maintien du potentiel de membrane mitochondriale, de la capacité respiratoire et de l’homéostasie bioénergétique cellulaire. Une altération de la fonction de l’ATP synthase peut modifier la gestion des espèces réactives de l’oxygène, la signalisation métabolique et les réponses au stress, reliant ainsi les voies associées à ATP5B à des phénotypes de dysfonctionnement mitochondrial étudiés dans la neurodégénérescence, les maladies cardiométaboliques et le métabolisme du cancer. Dans les modèles murins, Atp5b est largement utilisé pour examiner comment la production d’ATP mitochondriale contraint la prolifération et la différenciation cellulaires, ainsi que les besoins énergétiques spécifiques des tissus.

ATP5B Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Atp5b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Atp5b. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Atp5b. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Atp5b.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.