ATP5B Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-419247-NIC

Atp5b codifica a subunidade β da ATP sintase mitocondrial (ATP5B), um componente central do complexo V da fosforilação oxidativa, que catalisa a produção de ATP a partir de ADP e fosfato inorgânico. A ATP5B sustenta a conversão de energia acoplada ao fluxo de prótons através da membrana interna mitocondrial e contribui para a manutenção do potencial de membrana mitocondrial, da capacidade respiratória e da homeostase bioenergética celular. A disrupção da função da ATP sintase pode alterar o controle de espécies reativas de oxigênio, a sinalização metabólica e as respostas ao estresse, conectando vias relacionadas à ATP5B a fenótipos de disfunção mitocondrial estudados em neurodegeneração, doença cardiometabólica e metabolismo do câncer. Em modelos murinos, Atp5b é amplamente utilizado para investigar como a produção mitocondrial de ATP limita a proliferação e a diferenciação celulares e a demanda energética específica de cada tecido.

ATP5B O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Atp5b em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Atp5b. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Atp5b. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Atp5b interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.