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ATP11B慢病毒激活颗粒(h) | sc-411692-LAC | 200 µl | $455.00 |
ATP11B 编码一种 P4-ATPase 型磷脂翻转酶(phospholipid flippase),通过 ATP 依赖的方式将氨基磷脂跨脂双层转运,从而帮助维持细胞质膜及细胞器膜的脂质不对称性。ATP11B 通过调控膜组成影响囊泡形成、内体运输与回收等过程,这些过程与高尔基体–内体转运以及更广泛的分泌途径动态相互交织。脂质不对称性与运输过程的扰动会影响信号传导、细胞极性和应激反应,因此 ATP11B 与膜稳态及运输相关表型研究密切相关。在疾病相关的细胞行为背景下,人们也考察了 ATP11B 活性或表达改变,例如药物处理能力、应激条件下的存活,以及膜蛋白细胞内分布的变化等。
ATP11B 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 ATP11B 表达。
ATP11B 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在ATP11B转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性ATP11B表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 ATP11B 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。