Atm Plasmide Double Nickase (h): sc-400192-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Atm Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Atm Double Nickase Plasmid (h) e il Atm Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATM. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Atm Antibody (G-12): sc-377293
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Atm Plasmide Double Nickase (h) | sc-400192-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Atm Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400192-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATM codifica la chinasi serina/treonina Atm, un regolatore centrale della risposta al danno al DNA, attivata principalmente dalle rotture a doppio filamento. Dopo il reclutamento da parte del complesso MRN, Atm fosforila substrati chiave come H2AX, TP53, CHK2 e BRCA1 per coordinare i checkpoint del ciclo cellulare, la scelta della via di riparazione del DNA e le decisioni tra apoptosi e senescenza. La segnalazione mediata da ATM integra la ricombinazione omologa e la giunzione delle estremità non omologhe con il rimodellamento della cromatina e le risposte allo stress replicativo, al fine di preservare la stabilità del genoma. L’alterazione di ATM è associata a neurodegenerazione e sindromi di predisposizione tumorale, e la disfunzione della via di ATM è spesso studiata in contesti di instabilità genomica e di controllo dei checkpoint alterato.
Atm Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATM nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATM. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATM. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATM interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.