ATIII Double Nickaseプラスミド (h): sc-403735-NIC

SERPINC1はアンチトロンビンIII（ATIII）をコードしている。ATIIIは分泌型のセリンプロテアーゼ阻害因子で、トロンビンやFXa、FIXaなどの活性化凝固因子を不活化することにより凝固を抑制する。その活性はヘパラン硫酸およびヘパリンによって増強される。ATIIIは止血の中枢的な制御因子であり、フィブリン形成、血管内皮の恒常性、炎症に関連した凝固シグナルを制御するプロテアーゼカスケードと連関している。SERPINC1の変異または機能活性の低下は凝固制御の破綻と血栓傾向に関連するため、抗凝固経路のバランスを研究する上で重要な遺伝子座である。さらにATIIIは主に肝細胞で産生され、全身循環に存在することから、SERPINC1は血漿中における分泌タンパク質の生合成や細胞外プロテアーゼ制御の研究にも関係する。

ATIII ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SERPINC1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SERPINC1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SERPINC1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SERPINC1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。