ATIII Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403735-ACT

SERPINC1 codifica a antitrombina III (ATIII), um inibidor de serinoproteases produzido no fígado que neutraliza enzimas-chave da coagulação, incluindo a trombina e o fator Xa, mantendo assim o equilíbrio hemostático. A atividade da ATIII é potencializada pelo sulfato de heparano e por heparinas farmacológicas, o que vincula o SERPINC1 à regulação da cascata de coagulação dependente de glicosaminoglicanos. Alterações na expressão ou na função de SERPINC1 estão associadas à desregulação da geração de trombina e a perturbações na formação de fibrina, tornando-o relevante para o estudo de mecanismos de trombofilia e do controle da rede de coagulação. Em fluxos de trabalho de biologia celular e de sistemas, SERPINC1 oferece um ponto de análise acessível para investigar a dinâmica protease–inibidor, a comunicação endotélio–fígado e as interfaces entre inflamação e coagulação.

ATIII O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SERPINC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ATIII O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SERPINC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SERPINC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ATIII. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SERPINC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ATIII no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ATIII em células tumorais com expressão de SERPINC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.