Atg9a CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-434176

概要

Atg9a は、マクロオートファジーにおける膜供給を支えるため、トランスゴルジネットワーク、エンドソーム、形成途上のオートファゴソームの間を往復輸送する、保存性の高い多回膜貫通型膜タンパク質 ATG9A をコードしている。Atg9a は、ファゴフォアの伸長およびオートファゴソーム新生を制御するコア・オートファジー機構の一部として機能し、栄養感知系やストレス応答性経路からのシグナルを統合して、リソソームによる分解回転に影響を与える。マウス系では、Atg9a 活性の変化を利用して、ミトファジーや小胞体（ER）恒常性を含む、タンパク質およびオルガネラの品質管理に対するオートファジー依存的制御を解析する。ATG9A 関連オートファジーの制御異常は、神経変性、感染生物学、炎症性表現型と関連づけられており、細胞ストレスや組織維持の機構研究において重要である。

Atg9a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAtg9a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Atg9a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Atg9aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Atg9aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Atg9aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Atg9a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Atg9aの機能に不可欠なAtg9aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Atg9aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Atg9a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAtg9a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Atg9a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Atg9a HDRプラスミド（m）および Atg9a HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAtg9aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAtg9a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。