ATG7 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400997-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- ATG7O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase ATG7 (h) e o Plasmídeo Double Nickase ATG7 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para ATG7. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:ATG7 Anticorpo (B-9): sc-376212
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
ATG7 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400997-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATG7 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400997-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATG7 codifica uma enzima ativadora do tipo E1 que é essencial para a biogénese de autofagossomas, ao catalisar reações de conjugação semelhantes à ubiquitinação no sistema ATG12–ATG5 e ao promover a lipidização de LC3/ATG8 por meio de ATG3. Por meio dessas atividades, a ATG7 coordena a macroautofagia e contribui para a proteostase celular, a adaptação ao stress nutricional, o controlo de qualidade mitocondrial e a modulação da sinalização inata e inflamatória. Alterações na função ou na expressão de ATG7 têm sido associadas a um fluxo autofágico desregulado e a maior sensibilidade ao stress celular, com relevância para neurodegeneração, biologia do cancro, disfunção metabólica e interações hospedeiro–patógeno relacionadas a infeções. Assim, a ATG7 é amplamente utilizada como ferramenta genética para investigar fenótipos dependentes de autofagia e a comunicação cruzada entre vias.
ATG7 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ATG7 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ATG7. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ATG7. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ATG7 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.