Atg16 Plasmide Double Nickase (h): sc-404024-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Atg16 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Atg16 Double Nickase Plasmid (h) e il Atg16 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATG16L1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Atg16 Antibody (E-10): sc-393274
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Atg16 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404024-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Atg16 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404024-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATG16L1 codifica Atg16, un componente centrale del complesso ATG12–ATG5–ATG16L1, necessario per la biogenesi degli autofagosomi e per la lipidazione di LC3/ATG8 durante la macroautofagia. Coordinando l’espansione del fagoforo e il sequestro del carico, ATG16L1 contribuisce a regolare l’omeostasi cellulare, il controllo di qualità di proteine e organelli e le risposte allo stress metabolico e infiammatorio. L’autofagia dipendente da ATG16L1 si interfaccia con la segnalazione dell’immunità innata, inclusa la xenofagia antibatterica e il controllo dell’attività dell’inflammasoma, collegando questa via alla regolazione della barriera mucosale e dell’immunità. La variabilità genetica e l’alterazione della funzione di ATG16L1 sono state associate alla suscettibilità alle malattie infiammatorie intestinali e a interazioni ospite–microbiota disregolate, stimolando studi meccanicistici in modelli cellulari epiteliali e immunitari pertinenti.
Atg16 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATG16L1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATG16L1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATG16L1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATG16L1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.