Plasmide Double Nickase (m) ASPP1: sc-423473-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) ASPP1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ASPP1 Double Nickase (m) et le plasmide ASPP1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ppp1r13b. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ASPP1 Antibody (LX011): sc-53903
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) ASPP1 | sc-423473-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Ppp1r13b* code la protéine 1 stimulant l’apoptose de p53 (ASPP1), un régulateur nucléaire qui module des programmes transcriptionnels contrôlant l’apoptose, les points de contrôle du cycle cellulaire et les réponses au stress. ASPP1 interagit avec les membres de la famille p53 et influence l’expression de cibles pro‑apoptotiques, ce qui la relie à la signalisation des dommages à l’ADN et au contrôle transcriptionnel associé à la chromatine. Par ces interactions, ASPP1 contribue à des décisions de destinée cellulaire pertinentes pour la suppression tumorale, la stabilité génomique et l’homéostasie tissulaire. Une activité ou une expression dérégulée d’ASPP1 a été associée à des seuils apoptotiques modifiés et à des phénotypes liés au cancer, ce qui soutient son étude dans les voies oncogéniques et les réseaux de réponse aux dommages.
ASPP1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ppp1r13b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ppp1r13b. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ppp1r13b. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ppp1r13b.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.