Plasmide CRISPR d'Activation (m) ASCL1: sc-421562-ACT

Ascl1 code pour le facteur de transcription bHLH ASCL1 de la famille achaete-scute chez la souris, un régulateur proneural qui pilote l’engagement dans la lignée neuronale et la différenciation. ASCL1 coordonne des programmes d’expression génique contrôlant la sortie du cycle cellulaire, la maturation des progéniteurs neuraux et la croissance des neurites via des réseaux transcriptionnels dépendants du bHLH/E-box et le remodelage de la chromatine. Dans des modèles de développement et de maladie, une activité d’ASCL1 altérée est associée à une neurogenèse perturbée et à une plasticité de lignée, et elle est fréquemment étudiée dans des contextes où l’état de différenciation neuronale influence le comportement cellulaire. Ces propriétés font d’ASCL1 un nœud central pour explorer les voies du développement neural et les circuits transcriptionnels dans des systèmes murins.

ASCL1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ascl1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ASCL1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ascl1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ascl1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ASCL1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ascl1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ASCL1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ASCL1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Ascl1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.