ARP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405241

概要

NR2F2はヒトのオーファン核内受容体ARP-1（COUP-TFIIとも呼ばれる）をコードしており、リガンド非依存的に働く転写因子として、単量体またはヘテロ二量体でDNAに結合し、発生および代謝に関わる遺伝子プログラムを制御します。ARP-1は、核内受容体間のクロストークやエンハンサー活性に結び付いたネットワークを転写制御することで、細胞運命決定、血管新生・リンパ管新生過程、器官形成を形作るシグナル入力を統合します。成人組織では、NR2F2は血管平滑筋および内皮の生物学、脂肪細胞分化、ミトコンドリア／代謝の恒常性に影響を及ぼし、その作用は状況に依存して増殖や分化にも影響します。NR2F2の発現や活性の異常は、がんの病態、先天性心血管異常、代謝性疾患と関連づけられており、転写制御や系譜決定の機構研究において広く用いられる重要なノードとなっています。

ARP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNR2F2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NR2F2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NR2F2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ARP-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ARP-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NR2F2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ARP-1の機能に不可欠なNR2F2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NR2F2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ARP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびARP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NR2F2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ARP-1 HDRプラスミド（h）および ARP-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNR2F2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNR2F2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。