Plasmide CRISPR d'Activation (h) ARID1A: sc-400469-ACT

ARID1A code une sous-unité centrale du complexe de remodelage de la chromatine SWI/SNF (BAF) dépendant de l’ATP, qui régule le positionnement des nucléosomes afin de contrôler les programmes transcriptionnels, la spécification des lignages et les points de contrôle du cycle cellulaire. En contrôlant l’accessibilité de la chromatine, ARID1A influence les réponses aux dommages de l’ADN et les voies de maintien de la stabilité du génome, notamment via une coordination avec les signalisations associées à p53 et au stress de réplication. La dérégulation ou la perte d’activité d’ARID1A est fréquemment liée à une reprogrammation épigénétique et à une utilisation modifiée des enhancers, susceptibles d’affecter la différenciation et la capacité proliférative. ARID1A est récurrentement altéré dans de nombreux types de tumeurs et fait l’objet de nombreuses études pour son rôle dans les transitions d’état de la chromatine, l’occupation des facteurs de transcription et des vulnérabilités dépendantes du contexte.

ARID1A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ARID1A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ARID1A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ARID1A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ARID1A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ARID1A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ARID1A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ARID1A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ARID1A dans les cellules tumorales présentant une expression de ARID1A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.