ARF3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402706-NIC

ADPリボシル化因子3（ARF3）はARFファミリーに属する小型GTPアーゼであり、ゴルジ体およびエンドソーム系において、コートタンパク質のリクルート、膜の曲率、リン脂質代謝を制御することで小胞輸送を調節します。GDP結合状態とGTP結合状態の間を循環することで、ARF3は分泌輸送およびエンドサイトーシス輸送（COPI介在性の逆行性輸送や、カーゴのソーティング制御を含む）と結び付けられています。細胞内膜における膜動態とシグナル伝達に関わる役割を通じて、ARF3は受容体のリサイクリング、タンパク質分泌、細胞骨格の編成などの過程に影響を与えます。ARFファミリーのシグナル伝達や輸送経路の破綻は、細胞移動、増殖、ストレス応答の変化と関連していることが報告されており、ARF3は疾患関連モデルにおける輸送異常に起因する表現型の機構解析に有用な標的となります。

ARF3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ARF3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ARF3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ARF3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ARF3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。