Aquaporin 2/AQP2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400402-ACT

アクアポリン2（AQP2）は、バソプレシンによって調節される水チャネルで、主に腎臓の集合管主細胞に発現し、上皮横断的な水透過性と全身の水恒常性を制御している。AQP2の管腔側（頂端側）膜へのトラフィッキングは、AVPR2–cAMP–PKAシグナル伝達およびリン酸化依存的な相互作用によって統御され、これらが小胞のリサイクリング、膜挿入、エンドサイトーシスを調節する。浸透圧に依存した水輸送を上皮の極性やタイトジャンクション機能と連動させることで、AQP2は腎の尿濃縮機構および水分状態への適応に寄与する。AQP2の発現、リン酸化、またはトラフィッキングの異常は、尿濃縮能低下の表現型と関連し、腎性尿崩症や、集合管機能障害に伴う水バランス異常などが含まれる。

Aquaporin 2/AQP2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AQP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Aquaporin 2/AQP2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AQP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAQP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Aquaporin 2/AQP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAQP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAquaporin 2/AQP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAQP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAquaporin 2/AQP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。