APRIL Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403150-ACT

TNFSF13 codifica APRIL (ligante indutor de proliferação), uma citocina da superfamília TNF produzida predominantemente por células mieloides, que sustenta a sobrevivência de células B, a recombinação de troca de classe e a manutenção de plasmócitos. APRIL sinaliza principalmente por meio dos receptores TACI (TNFRSF13B) e BCMA (TNFRSF17), ativando programas de NF-κB e MAPK que coordenam as respostas de anticorpos e a homeostase imunológica. Por regular a produção de imunoglobulinas e a longevidade dos plasmócitos, a atividade desregulada de APRIL está associada à ativação aberrante de células B e à sinalização inflamatória observadas em diferentes contextos de doenças autoimunes e linfoproliferativas. Assim, a biologia da via de APRIL é relevante para estudos mecanísticos da imunidade humoral, das interações tumor–sistema imune e de redes de sinalização impulsionadas por citocinas.

APRIL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNFSF13 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

APRIL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNFSF13 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNFSF13, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de APRIL. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNFSF13 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de APRIL no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via APRIL em células tumorais com expressão de TNFSF13 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.