Apolipoprotein A I/APOA1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400499-ACT

APOA1 codifica a apolipoproteína A-I, o principal componente proteico das partículas de lipoproteína de alta densidade (HDL) e um mediador central da homeostase do colesterol. A ApoA-I promove o efluxo de colesterol e fosfolipídios dependente de transportadores da família ATP-binding cassette (notavelmente via ABCA1 e ABCG1), sustenta a biogênese de HDL nascente e participa do transporte reverso de colesterol para o fígado. Por meio de interações com a lecitina–colesterol aciltransferase (LCAT) e com vias de remodelamento de HDL, a APOA1 influencia a maturação das lipoproteínas e o tráfego sistêmico de lipídios. A expressão ou função desregulada de APOA1 está associada a alterações no metabolismo de HDL e é amplamente estudada no contexto da biologia da aterosclerose, de respostas inflamatórias e de mecanismos de doenças metabólicas.

Apolipoprotein A I/APOA1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de APOA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Apolipoprotein A I/APOA1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus APOA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição APOA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Apolipoprotein A I/APOA1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus APOA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Apolipoprotein A I/APOA1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Apolipoprotein A I/APOA1 em células tumorais com expressão de APOA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.