apoD CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419166

概要

マウスのApodは、アポリポタンパク質D（apoD）をコードしている。apoDはリポカリンに属し、コレステロール、アラキドン酸、脂質過酸化産物などの疎水性リガンドに結合して、脂質輸送およびレドックス恒常性の維持を担う。apoDの発現は酸化ストレス、炎症、細胞老化に対する応答と関連しており、神経系および末梢組織において膜脂質リモデリングやリポタンパク質関連経路に影響を及ぼし得る。脳およびグリアでは、apoDは髄鞘形成、シナプス維持、損傷応答といった文脈で研究されており、Apodの制御が神経変性に関わるプロセスと結び付くことが示唆されている。さらに、apoD量の変化は代謝および炎症の表現型とも関連付けられており、Apodは疾患関連モデルにおける脂質取り扱い機構を解析するうえで有用な結節点となる。

apoD CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるApod遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Apod内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Apodのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、apoDタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、apoDシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Apod欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• apoDの機能に不可欠なApodエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Apodゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• apoD CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびapoD CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Apod遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  apoD HDRプラスミド（m）および apoD HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはApodホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のApod標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。