apoBCRISPR激活质粒(h): sc-400705-ACT
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- apoB CRISPER激活质粒（h）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- apoB CRISPR 激活质粒 (h)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 apoB CRISPR 激活质粒 (h) 和 apoB CRISPR 激活质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别针对 APOB 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：apoB: sc-393636，通过WB, IF或者IHC分析
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
apoBCRISPR激活质粒(h) | sc-400705-ACT | 20 µg | $397.00 |
人类 APOB 基因编码载脂蛋白 B（apoB）。apoB 是致动脉粥样硬化性脂蛋白的重要结构组分，在肝细胞中为极低密度脂蛋白（VLDL）的组装提供支架，并在循环中支持其向低密度脂蛋白（LDL）的转化。apoB 通过调控脂蛋白的生物发生、分泌以及受体介导的摄取等通路参与脂质转运与胆固醇稳态，并与内质网加工过程及富含甘油三酯颗粒的代谢相耦联。APOB 表达或含 apoB 颗粒生成的失调与高脂血症状态及心血管疾病生物学密切相关，同时也与肝脏脂质处理以及脂肪变性相关机制有关。因此，APOB 被广泛用于在研究体系中模拟脂蛋白代谢、apoB 颗粒动力学，以及其下游的炎症与血管反应。
apoB CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性APOB的表达。
apoB CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的APOB基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于APOB转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性apoB表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的APOB位点，并能够研究内源性位点上依赖于apoB的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在APOB表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟apoB通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。