Plasmide CRISPR d'Activation (h) apoA-II: sc-404987-ACT

L’APOA2 humain code l’apolipoprotéine A‑II (apoA‑II), un composant structurel majeur des lipoprotéines de haute densité (HDL) qui module la stabilité des particules lipoprotéiques, la liaison aux lipides et les échanges avec les enzymes plasmatiques et les protéines de transfert. L’apoA‑II influence l’homéostasie du cholestérol et des triglycérides en façonnant le remodelage des HDL et en affectant les interactions avec les voies qui régulent le métabolisme des lipoprotéines, notamment l’activité de la lécithine–cholestérol acyltransférase et les processus de transfert lipidique. Des altérations de l’expression d’APOA2 ou des niveaux d’apoA‑II ont été associées à des phénotypes liés à la dyslipidémie et à des traits de risque cardiométabolique, ce qui étaye sa pertinence pour des études mécanistiques en biologie des lipides. Dans les contextes hépatique et intestinal, l’apoA‑II contribue au transport lipidique systémique et peut influencer des voies de signalisation inflammatoires et métaboliques liées à des processus associés à l’athérosclérose.

apoA-II Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de APOA2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

apoA-II Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus APOA2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription APOA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de apoA-II. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus APOA2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de apoA-II au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie apoA-II dans les cellules tumorales présentant une expression de APOA2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.