APLNR Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423839-ACT

O gene Aplnr de camundongo codifica o recetor de apelina (APLNR), um GPCR de classe A que se liga a peptídeos de apelina e a ELABELA/Toddler para regular a sinalização dependente de proteína G, incluindo a modulação de cAMP, o fluxo intracelular de Ca2+, e as vias PI3K–AKT e MAPK/ERK. A atividade do APLNR influencia a função endotelial e do músculo liso vascular, respostas angiogénicas, o desenvolvimento e a remodelação cardíacos, e a homeostase de fluidos, por meio do controlo integrado de migração, proliferação e propriedades de barreira. Nos sistemas nervoso e metabólico, a sinalização via APLNR tem sido associada ao acoplamento neurovascular e ao equilíbrio energético, posicionando o Aplnr como um nó mecanístico que liga programas de desenvolvimento e adaptação ao stress. A atividade desregulada da via APLNR está associada a fenótipos cardiometabólicos, disfunção vascular e angiogénese associada a tumores, tornando-a relevante para o mapeamento de vias em modelos de doença.

APLNR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Aplnr sem alterar a sequência de ADN subjacente.

APLNR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Aplnr em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Aplnr, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de APLNR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Aplnr nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de APLNR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via APLNR em células tumorais com expressão de Aplnr silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.