Ape2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407307

概要

ヒトのAPEX2は、アプリニック／アピリミジニックエンドヌクレアーゼ2（Ape2）をコードしており、アベーシック部位を認識してDNA塩基除去修復およびゲノム維持に関与するヌクレアーゼです。Ape2は損傷したDNA末端の処理に寄与し、酸化損傷や複製に伴う損傷に対する細胞応答を支えることで、複製ストレスの制御やチェックポイントシグナル伝達と機能的に結び付いています。DNA損傷の蓄積と解消に影響を与えることから、APEX2の機能は、がんなどDNA修復能の低下に関連する疾患でみられる突然変異誘発や染色体不安定性の基盤となる機構とも関係します。そのため、APEX2はDNA損傷応答のクロストーク、酸化ストレス生物学、修復経路の選択といった文脈で頻繁に研究されています。

Ape2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAPEX2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、APEX2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、APEX2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Ape2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Ape2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、APEX2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Ape2の機能に不可欠なAPEX2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、APEX2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Ape2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびApe2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、APEX2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Ape2 HDRプラスミド（h）および Ape2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAPEX2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAPEX2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。