APC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405103-ACT

O gene humano **ANAPC1** codifica a proteína **APC1**, uma subunidade estrutural central do complexo promotor de anáfase/ciclossomo (**APC/C**), uma ligase E3 de ubiquitina essencial que coordena a proteólise ordenada durante a mitose e a fase G1. Por meio das interações do APC/C com coativadores como **CDC20** e **CDH1**, a APC1 sustenta a ubiquitinação e a degradação de reguladores-chave do ciclo celular, garantindo assim o controle do checkpoint do fuso, a saída da mitose e a estabilidade do genoma. A desregulação da atividade do APC/C e de vias relacionadas de ubiquitina–proteassoma está associada à instabilidade cromossômica e a alterações na sinalização proliferativa, tornando **ANAPC1** um ponto relevante para estudos de controle do ciclo celular e de fenótipos associados ao câncer.

APC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ANAPC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

APC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ANAPC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ANAPC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de APC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ANAPC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de APC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via APC1 em células tumorais com expressão de ANAPC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.