Annexin V CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419117

概要

マウスのAnxa5はアネキシンVをコードしており、Ca²⁺依存的にリン脂質へ結合するタンパク質で、細胞膜の内葉に結合し、膜リモデリングが起こる部位へ迅速にリクルートされます。アネキシンVは膜修復、小胞輸送、細胞骨格動態の制御に関与し、アポトーシス時のホスファチジルセリン露出を検出する分子マーカーとして広く用いられています。陰性荷電リン脂質との相互作用を介して、アネキシンVはカルシウムシグナル伝達に連動した過程に影響を与え、炎症や凝固に関わる膜イベントを調節し得ます。ANXA5の発現量や局在の変化は、細胞死応答の破綻や組織傷害の状況と関連づけられており、免疫活性化、心血管生物学、がん細胞ストレスのモデルにおける研究対象として支持されています。

Annexin V CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAnxa5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Anxa5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Anxa5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Annexin Vタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Annexin Vシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Anxa5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Annexin Vの機能に不可欠なAnxa5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Anxa5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Annexin V CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAnnexin V CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Anxa5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Annexin V HDRプラスミド（m）および Annexin V HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAnxa5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAnxa5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。