Androgen Receptor CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419181-ACT

Mouse Ar はアンドロゲン受容体（AR）をコードしており、アンドロゲンをリガンドとして活性化される核内受容体型の転写因子である。AR はアンドロゲンに結合して遺伝子発現プログラムを制御し、生殖発生、性分化、ならびに同化代謝を調節する。活性化に伴いアンドロゲン受容体は核へ移行し、アンドロゲン応答配列（ARE）に結合するとともに、クロマチンリモデリング因子や共役因子複合体と協調して、細胞増殖・分化・組織恒常性を司る転写ネットワークを調節する。AR シグナルは PI3K/AKT、MAPK、Wnt/β-カテニン経路とも交差し、複数臓器におけるステロイド産生や成長因子応答へのフィードバックを形成する。AR 活性の破綻は内分泌および生殖に関わる表現型に関与し、ホルモン依存性の病態生物学へ至る機序的な連関を与えることから、Ar は in vivo および細胞モデルにおける核内受容体による転写制御の研究における中核的ノードとなる。

Androgen Receptor CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Arの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Androgen Receptor CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Ar 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAr転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Androgen Receptorの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAr遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAndrogen Receptor依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAr発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAndrogen Receptor経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。