Amphiregulin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400987-ACT

AREG codifica a anfiregulina, um ligante secretado do recetor do fator de crescimento epidérmico (EGFR) que regula a proliferação, a sobrevivência e a diferenciação de células epiteliais por meio de sinalização a jusante pelas vias MAPK/ERK, PI3K/AKT e JAK/STAT. A anfiregulina é induzível por estímulos inflamatórios e contribui para a reparação tecidular, a comunicação estroma–epitélio e a remodelação do microambiente local. A desregulação da sinalização AREG–EGFR tem sido associada a respostas imunitárias alteradas e a programas de crescimento aberrantes observados em diversos contextos de doença, incluindo a biologia do cancro e estados inflamatórios crónicos. Como leitura da atividade da via do EGFR, a expressão de AREG é frequentemente utilizada para estudar a dinâmica de sinalização dependente de ligante, a regulação por feedback e redes de sinalização parácrina.

Amphiregulin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AREG sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Amphiregulin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AREG em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AREG, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Amphiregulin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AREG nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Amphiregulin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Amphiregulin em células tumorais com expressão de AREG silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.