AMPD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419101

概要

Ampd3 は AMP デアミナーゼ3（AMPD3）をコードしており、AMP を IMP に脱アミノ化する反応を触媒する酵素です。これにより、アデニンヌクレオチドのバランスや細胞のエネルギーチャージの調節に寄与します。AMP の利用可能量を変化させることで、AMPD3 はプリンヌクレオチド代謝に影響を与え、ATP ターンオーバーが動的に変化する組織において、エネルギーストレスの感知を下流の代謝適応へと結び付けます。AMP の脱アミノ化が変化すると IMP/AMP プールがシフトし、ヌクレオチドサルベージ、ミトコンドリア機能、酸化還元（レドックス）恒常性に関連する経路に影響を及ぼし得ます。プリン代謝の破綻は代謝ストレスや組織リモデリングのモデルと関係が深く、Ampd3 はマウス系で機序解析を行う上で有用な標的となります。

AMPD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAmpd3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ampd3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ampd3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AMPD3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AMPD3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ampd3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AMPD3の機能に不可欠なAmpd3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ampd3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AMPD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAMPD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ampd3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AMPD3 HDRプラスミド（m）および AMPD3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAmpd3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAmpd3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。