AMID/AIFM2/FSP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406251

概要

AIFM2（AMID/FSP1としても知られる）は、酸化還元恒常性およびミトコンドリア関連の細胞死シグナル伝達に関与するとされるフラビンタンパク質オキシドレダクターゼをコードします。FSP1は膜上でNAD(P)H依存性のCoQ10（コエンザイムQ10）オキシドレダクターゼとして機能し、グルタチオン非依存的に脂質過酸化に対する防御を提供して、フェロトーシスによる細胞死を抑制します。活性酸素種（ROS）の制御、膜脂質の完全性、ならびにアポトーシス／ミトコンドリアストレス応答との関連を通じて、AMID/AIFM2は酸化ストレス生物学および代謝適応の研究で頻繁に解析されています。AIFM2/FSP1活性の破綻は、治療抵抗性や腫瘍細胞の生存と関連する状況で報告されており、ストレス下における細胞運命決定の機構研究において重要な標的となっています。

AMID/AIFM2/FSP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAIFM2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、AIFM2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、AIFM2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AMID/AIFM2/FSP1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AMID/AIFM2/FSP1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、AIFM2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AMID/AIFM2/FSP1の機能に不可欠なAIFM2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、AIFM2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AMID/AIFM2/FSP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAMID/AIFM2/FSP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、AIFM2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AMID/AIFM2/FSP1 HDRプラスミド（h）および AMID/AIFM2/FSP1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAIFM2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAIFM2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。