Plasmide Double Nickase (h) Aldolase C: sc-400988-NIC

ALDOC humain code l’aldolase C, une enzyme de la glycolyse qui catalyse la coupure réversible du fructose-1,6-bisphosphate en trioses phosphates, reliant le métabolisme des glucides à la production d’ATP cellulaire et aux flux biosynthétiques. L’aldolase C est enrichie dans le système nerveux central et est fréquemment utilisée comme marqueur de l’état métabolique neuronal et glial, avec des fonctions à l’interface de la glycolyse, de l’homéostasie énergétique et de l’équilibre rédox. Des modifications de l’expression d’ALDOC et une reprogrammation métabolique ont été associées à des dysfonctions neurologiques et ont également été observées dans divers contextes tumoraux, où le remodelage des voies glycolytiques soutient la prolifération et l’adaptation au stress. En tant que nœud métabolique, ALDOC constitue un point d’entrée accessible pour étudier la signalisation dépendante de la glycolyse, les réponses au stress cellulaire et la régulation tissu-spécifique du métabolisme énergétique.

Aldolase C Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ALDOC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ALDOC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ALDOC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ALDOC.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.