Aldolase C CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400988-ACT

ALDOCは、解糖系酵素であるアルドラーゼCをコードしており、フルクトース-1,6-ビスリン酸をグリセルアルデヒド-3-リン酸とジヒドロキシアセトンリン酸に可逆的に開裂する反応を触媒します。これにより、グルコース代謝をATP産生および生合成系へのフラックスと結び付けています。ヒト組織では、ALDOCはニューロンおよびアストロサイトの代謝プログラムと強く関連し、解糖系と細胞のレドックス恒常性やストレス応答との連関に寄与します。ALDOC発現の変化は、神経変性、虚血性障害、腫瘍代謝といった文脈で報告されており、代謝リプログラミングにおけるマーカーおよび機序的ハブとしての有用性が示唆されています。糖質代謝の中核要素として、アルドラーゼCは解糖系制御、エネルギー恒常性、ならびにミトコンドリア経路との代謝クロストークを研究するための足がかりとなります。

Aldolase C CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ALDOCの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Aldolase C CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ALDOC 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はALDOC転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Aldolase Cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のALDOC遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAldolase C依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびALDOC発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAldolase C経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。