ALCAM CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419076-ACT

Alcam は、活性化白血球細胞接着分子（ALCAM/CD166）をコードしており、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する受容体として、同種および異種分子間相互作用を介して細胞—細胞接着、移動、ならびにマウスの発生および成体の恒常性維持における組織構築を制御します。ALCAM は細胞骨格の再構築や接着結合部位のダイナミクスに関連する過程に関与し、上皮の完全性、神経軸索のガイダンス、免疫細胞のトラフィッキングに影響を及ぼします。接着依存的なシグナル伝達を通じて、ALCAM は増殖や分化を制御する経路を調節し得て、MAPK や PI3K-AKT シグナルの出力に対して状況依存的な影響を与えます。ALCAM 発現の異常は、複数の疾患モデルにおいて幹細胞様性質の変化、浸潤性、転移挙動の変化と関連づけられており、接着駆動性の表現型可塑性を研究するうえで有用なハブとなります。

ALCAM CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Alcamの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ALCAM CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Alcam 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAlcam転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ALCAMの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAlcam遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるALCAM依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAlcam発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるALCAM経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。