非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
ALAS-E 抗体 (D-4): sc-166739. 人宫颈组织提取物中 ALAS-E 表达的近红外 Western 印迹分析. 使用 UltraCruz® 阻断试剂: sc-516214. 使用的检测试剂: m-IgGκ BP-CFL 680: sc-516180.
非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
ALAS-E CRISPR/Cas9 KO质粒 (h): sc-403752
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- ALAS-E CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（h） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在ALAS-E基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：ALAS-E: sc-166739，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
ALAS-E CRISPR/Cas9 KO质粒 (h) | sc-403752 | 20 µg | $397.00 |
概述
ALAS2 编码红系特异性的 5-氨基乙酰丙酸合酶（ALAS-E），这是一种位于线粒体内、依赖磷酸吡哆醛的酶。它通过将甘氨酸与琥珀酰辅酶 A 缩合生成 5-氨基乙酰丙酸，催化血红素生物合成的第一步且为限速步骤。其活性将线粒体代谢与红系分化及血红蛋白化过程相整合，在发育中的红细胞中支持铁的利用和卟啉的生成。ALAS-E 受红系转录程序以及血红素/铁可用性的调控，因此与控制红芽球线粒体功能和氧化应激的通路相联系。ALAS2 的遗传或功能扰动与卟啉/血红素合成紊乱相关，可在红系成熟及红细胞病理生理的模型中进行研究。
ALAS-E CRISPR/Cas9 KO质粒（h）是一组旨在针对性地破坏human细胞系中ALAS2基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对ALAS2基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏ALAS2开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使ALAS-E蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建ALAS2缺失的细胞模型，用于ALAS-E信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 ALAS-E 功能至关重要的 ALAS2 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 ALAS2 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 ALAS-E CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h) 和 ALAS-E CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别靶向 ALAS2 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 ALAS-E HDR 质粒（h）编码的 HDR 供体构建体以及 ALAS-E HDR质粒（h2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由ALAS2同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定ALAS2靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。