AID Double Nickaseプラスミド (h): sc-401542-NIC

AICDAは、転写中の一本鎖DNAにおいてシトシンをウラシルへ脱アミノ化するDNA編集酵素、活性化誘導シチジン脱アミノ化酵素（AID）をコードします。活性化B細胞では、AIDは損傷形成を塩基除去修復（BER）およびミスマッチ修復（MMR）経路に結び付けることで、免疫グロブリン遺伝子の体細胞超変異とクラススイッチ組換えを開始し、抗体の親和性とアイソタイプを形成します。AID活性の制御不全は、標的外変異や染色体転座を引き起こし得るため、AICDAの異常は、B細胞性悪性腫瘍などで見られるゲノム不安定性や、異常なDNA損傷シグナル伝達が関与する状況と関連付けられています。その結果、AICDAは獲得免疫、突然変異誘発機構、ならびにDNA修復経路選択の研究で広く解析されています。

AID ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AICDA 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AICDA内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AICDAの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AICDAが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。