AGTPBP1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405311-NIC

AGTPBP1は、細胞質カルボキシペプチダーゼ1（CCP1）をコードしており、これは脱グルタミル化酵素として、チューブリンなどの基質に付加されたポリグルタミン酸側鎖を切り詰めることで、微小管の安定性やモーター依存的輸送を調節します。チューブリンの翻訳後修飾の制御を通じて、AGTPBP1は細胞骨格の構築、神経突起の維持、ならびに繊毛に関連する輸送経路に影響を与えます。AGTPBP1の機能が損なわれると、微小管依存的なダイナミクスが乱れ、分化細胞におけるプロテオスタシスやオルガネラ分布に障害が生じ得ます。AGTPBP1の遺伝学的変化は神経発達および神経変性の表現型と関連しており、神経細胞の健全性や細胞骨格制御を研究する標的として有用であることを示しています。

AGTPBP1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AGTPBP1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AGTPBP1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AGTPBP1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AGTPBP1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。