aggrecan Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400760-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- aggrecanO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase aggrecan (h) e o Plasmídeo Double Nickase aggrecan (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para ACAN. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:aggrecan Anticorpo (4F4): sc-33695
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
aggrecan Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400760-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
aggrecan Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400760-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACAN codifica a agrecano, um importante proteoglicano de sulfato de condroitina da matriz extracelular da cartilagem, que se liga ao hialuronano e à proteína de ligação (link protein) para formar grandes agregados que conferem resistência à compressão. A síntese, secreção e renovação do agrecano são parte integrante dos programas de diferenciação dos condrócitos e da homeostase da matriz, interagindo com vias que regulam a montagem e a remodelação da matriz extracelular, incluindo sinalização anabólica e clivagem mediada por proteases das famílias ADAMTS e MMP. Alterações na expressão de ACAN ou na integridade do agrecano modificam a biomecânica da cartilagem e a organização da matriz, contribuindo para fenótipos esqueléticos degenerativos e do desenvolvimento. Essas características fazem de ACAN um alvo central para o estudo da biologia da cartilagem, da comunicação cruzada (crosstalk) na sinalização da matriz extracelular e dos mecanismos de degradação da matriz.
aggrecan O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ACAN em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ACAN. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ACAN. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ACAN interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.