Plasmide Double Nickase (h) aggrecan: sc-400760-NIC

ACAN code l'agrécane, un protéoglycane majeur à chondroïtine sulfate de la matrice extracellulaire du cartilage, qui se lie à l'hyaluronane et à la protéine de liaison (link protein) pour former de grands agrégats conférant une résistance à la compression. La synthèse, la sécrétion et le renouvellement de l'agrécane sont des éléments clés des programmes de différenciation des chondrocytes et du maintien de l'homéostasie matricielle, en interaction avec des voies qui régulent l'assemblage et le remodelage de la matrice extracellulaire, notamment la signalisation anabolique et le clivage médié par des protéases des familles ADAMTS et MMP. Toute perturbation de l'expression d'ACAN ou de l'intégrité de l'agrécane modifie la biomécanique du cartilage et l'organisation de la matrice, contribuant à des phénotypes squelettiques dégénératifs et du développement. Ces caractéristiques font d'ACAN une cible centrale pour l'étude de la biologie du cartilage, du dialogue entre voies de signalisation de la matrice extracellulaire et des mécanismes de dégradation de la matrice.

aggrecan Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ACAN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ACAN. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ACAN. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ACAN.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.