aggrecan CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419039

概要

Acanは、軟骨細胞外マトリックスに存在する主要なコンドロイチン硫酸プロテオグリカンであるアグリカンをコードしており、ヒアルロン酸およびリンクタンパク質と大きな凝集体を形成することで、圧縮に対する弾性（耐圧性）を与えます。アグリカンの合成・分泌・マトリックスへの組み込みは、軟骨細胞の分化や成長板の成熟において中心的な過程であり、TGF-β、BMP、炎症性サイトカインのシグナルに影響される軟骨恒常性プログラムとも連動しています。ADAMTSファミリーのアグリカナーゼやマトリックスメタロプロテイナーゼによるアグリカンのタンパク質分解は、細胞外マトリックスのリモデリングと軟骨の健全性低下に寄与します。アグリカンの代謝回転の異常やAcan発現低下は、骨格異形成の表現型や変性性関節病変に関与するとされており、Acanはマウスモデルを用いた筋骨格・軟骨生物学研究における中核的な標的となっています。

aggrecan CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAcan遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Acan内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Acanのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、aggrecanタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、aggrecanシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Acan欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• aggrecanの機能に不可欠なAcanエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Acanゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• aggrecan CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびaggrecan CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Acan遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  aggrecan HDRプラスミド（m）および aggrecan HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAcanホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAcan標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。