ADRM1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406903-ACT

ADRM1 (molécula 1 reguladora de adesão), também conhecida como receptor de ubiquitina do proteassoma Rpn13, é uma subunidade da partícula regulatória 19S que se liga a substratos poliubiquitinados e facilita a sua entrega ao proteassoma 26S para degradação. Por meio de interações no sistema ubiquitina–proteassoma, a ADRM1 ajuda a manter a proteostase, modula a renovação de reguladores do ciclo celular e de resposta ao estresse, e influencia saídas de sinalização ligadas ao controle de qualidade proteica. O reconhecimento desregulado de substratos pelo proteassoma e a atividade alterada da ADRM1 têm sido associados a mudanças nos programas de viabilidade celular e em respostas adaptativas ao estresse proteotóxico. Como resultado, a ADRM1 é frequentemente estudada em contextos nos quais a degradação dependente de ubiquitina molda a proliferação, as respostas a danos no DNA e programas transcricionais associados à inflamação.

ADRM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADRM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ADRM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADRM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADRM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ADRM1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADRM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ADRM1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ADRM1 em células tumorais com expressão de ADRM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.