Plasmide CRISPR d'Activation (h) ADH1: sc-402260-ACT

ADH1A humain code l’alcool déshydrogénase 1A (ADH1), une oxydoréductase cytosolique dépendante du zinc qui catalyse l’oxydation de l’éthanol et d’autres alcools à chaîne courte en leurs aldéhydes correspondants, de manière dépendante du NAD⁺. Cette activité enzymatique contribue au métabolisme des xénobiotiques et à l’homéostasie des rétinoïdes en influençant l’interconversion des intermédiaires alcool/aldéhyde, en interaction avec les réactions des aldéhyde déshydrogénases. L’expression d’ADH1A est particulièrement marquée dans le foie et le tractus gastro-intestinal, où elle module l’équilibre rédox cellulaire (NADH/NAD⁺) et affecte les flux métaboliques en aval via des voies liées aux aldéhydes et à l’acétyl-CoA. Une régulation altérée ou des variations génétiques des gènes impliqués dans le métabolisme alcool/aldéhyde, y compris des membres de la famille ADH, sont associées à des différences de susceptibilité aux lésions tissulaires liées à l’alcool et aux réponses à l’exposition aux carcinogènes, faisant d’ADH1A un nœud pertinent pour des études mécanistiques de maladies centrées sur le métabolisme.

ADH1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ADH1A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ADH1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ADH1A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ADH1A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ADH1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ADH1A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ADH1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ADH1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ADH1A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.