Plasmide CRISPR d'Activation (m) Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3: sc-430515-ACT

Le gène murin *Adcy3* code l’adénylate cyclase 3 (AC3/ADCY3), une enzyme associée à la membrane qui convertit l’ATP en AMPc afin de coupler la signalisation des GPCR aux voies effectrices en aval PKA et EPAC. La production d’AMPc dépendante d’ADCY3 façonne des programmes transcriptionnels dépendants du stimulus via CREB et contribue à coordonner des réponses cellulaires telles que la détection métabolique, la signalisation neuroendocrine, ainsi que des processus neuronaux et sécrétoires régulés. Chez la souris, la fonction d’*Adcy3* est souvent étudiée dans des contextes où la dynamique de l’AMPc contrôle l’équilibre énergétique et la transduction sensorielle, fournissant des liens mécanistiques avec des phénotypes liés à l’obésité et une dysrégulation métabolique plus large. En tant que nœud de signalisation, ADCY3 est également pertinent pour disséquer les interactions (crosstalk) entre les entrées GPCR et le contrôle, par des seconds messagers, de l’expression génique.

Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Adcy3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Adcy3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Adcy3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Adcy3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 dans les cellules tumorales présentant une expression de Adcy3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.