Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-430515-ACT

O gene Adcy3 de camundongo codifica a adenilato ciclase 3 (AC3/ADCY3), uma enzima associada à membrana que converte ATP em cAMP para acoplar a sinalização de GPCR às vias efetoras a jusante mediadas por PKA e EPAC. A produção de cAMP dependente de ADCY3 molda programas transcricionais dependentes de estímulo via CREB e ajuda a coordenar respostas celulares como detecção metabólica, sinalização neuroendócrina e processos regulados de secreção e neuronais. Em camundongos, a função de Adcy3 é frequentemente estudada em contextos nos quais a dinâmica de cAMP controla o equilíbrio energético e a transdução sensorial, fornecendo ligações mecanísticas com fenótipos relacionados à obesidade e uma desregulação metabólica mais ampla. Como um hub de sinalização, ADCY3 também é relevante para dissecar o crosstalk entre entradas de GPCR e o controle, por segundos mensageiros, da expressão gênica.

Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Adcy3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Adcy3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Adcy3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Adcy3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 em células tumorais com expressão de Adcy3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.