Adducin α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401693

Visão geral

ADD1 codifica a aducina α, uma proteína do citoesqueleto associada à membrana que atua como “tampão” (capping) nas extremidades dos filamentos de actina e promove a montagem da rede espectrina–actina no córtex celular. Ao regular a remodelação do citoesqueleto, a aducina α influencia a forma celular, a adesão e a estabilidade da membrana, com efeitos a jusante em processos como migração celular e mecanotransdução. A função da aducina é modulada por sinalização dependente de fosforilação, incluindo vias ligadas à PKC e à PKA, que alteram a dinâmica de ligação à actina e a organização cortical. A desregulação de proteínas do citoesqueleto e de ancoragem da membrana, incluindo ADD1, tem sido associada a alterações nas propriedades da barreira epitelial e a fenótipos celulares relevantes para a investigação cardiovascular e neurobiológica.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Adducin α (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ADD1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ADD1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ADD1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Adducin α.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ADD1 para a investigação da sinalização de Adducin α, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ADD1 críticos para a função Adducin α
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ADD1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Adducin α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Adducin α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ADD1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Adducin α Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Adducin α (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ADD1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ADD1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.