Plasmide Double Nickase (h) ADAR3: sc-402742-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ADAR3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ADAR3 Double Nickase (h) et le plasmide ADAR3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ADARB2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ADAR3 Antibody (3.591): sc-73410
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ADAR3 | sc-402742-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ADAR3 | sc-402742-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADARB2 code ADAR3, un membre enrichi dans le cerveau de la famille des adénosine désaminases agissant sur l’ARN, qui se lie à l’ARN double brin et participe à la régulation de la structure de l’ARN ainsi qu’au contrôle post-transcriptionnel de l’expression génique. Contrairement à ADAR1/ADAR2, qui sont catalytiquement actifs, ADAR3 est souvent décrit comme inactif sur le plan de l’édition, mais peut moduler les résultats de l’édition A→I de l’ARN en entrant en compétition pour les substrats d’ARNdb et en influençant le recodage des transcrits dépendant de l’édition, l’épissage, la stabilité de l’ARN et la maturation des miARN. Par ces mécanismes, ADAR3 intervient dans le développement neuronal, les programmes de signalisation synaptique et les voies de détection innée de l’ARN qui répondent à l’ARNdb endogène. Dans la littérature, une expression altérée d’ADARB2 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ainsi qu’à des signatures d’édition de l’ARN dérégulées observées dans des contextes de maladies neurologiques.
ADAR3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ADARB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ADARB2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ADARB2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ADARB2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.