ADAR3 더블 틈내기효소 플라스미드 (h): sc-402742-NIC

ADARB2는 ADAR3를 암호화하며, ADAR3는 이중가닥 RNA(dsRNA)에 결합하고 RNA 구조 조절 및 전사 후 유전자 조절에 관여하는 RNA 작용 아데노신 탈아미노화효소(ADAR) 계열의 뇌-풍부 발현 구성원이다. 촉매 활성이 있는 ADAR1/ADAR2와 달리 ADAR3는 대개 편집 활성이 없는 것으로 설명되지만, dsRNA 기질에 대해 경쟁적으로 결합하고 편집 의존적 전사체 리코딩, 스플라이싱, RNA 안정성, miRNA 처리에 영향을 줌으로써 A-to-I RNA 편집 결과를 조절할 수 있다. 이러한 기전을 통해 ADAR3는 신경 발달, 시냅스 신호전달 프로그램, 그리고 내인성 dsRNA에 반응하는 선천성 RNA 감지 경로와 교차한다. ADARB2 발현 변화는 문헌에서 신경발달 및 신경정신과적 표현형, 그리고 신경계 질환 맥락에서 관찰되는 비정상적 RNA 편집 시그니처와 연관된 것으로 보고되어 왔다.

ADAR3 더블 니카제 플라스미드(h)는 human 세포주 내 ADARB2 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 ADARB2 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 ADARB2의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.

편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, ADARB2 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.

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