ADAM22 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405581-ACT

ADAM22は、ADAM（a disintegrin and metalloprotease）ファミリーに属する神経細胞の膜貫通型タンパク質をコードしており、触媒活性をもつプロテアーゼというよりも、主として細胞表面で接着およびシグナル伝達のハブとして機能します。神経系では、ADAM22は分泌性リガンドであるLGI1に結合し、PSD関連スキャフォールドやイオンチャネル調節因子との複合体を安定化させることでシナプス構造を組織化し、興奮性シナプスの成熟と回路の興奮性を支えます。これらの相互作用を通じて、ADAM22はシナプスの維持、神経突起の構築、神経伝達の調節などの過程に寄与します。遺伝学的および機能的研究により、ADAM22/LGI1シグナル伝達の破綻が神経発達および発作関連の表現型と関連することが示されており、シナプス機能不全の機序解明研究における重要な標的となっています。

ADAM22 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ADAM22の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ADAM22 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ADAM22 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はADAM22転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ADAM22の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のADAM22遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるADAM22依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびADAM22発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるADAM22経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。