ACTG1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400006

概要

ACTG1は細胞質型γアクチンをコードしており、これは高度に保存されたアクチンのアイソフォームの一つです。細胞質型γアクチンは重合してマイクロフィラメントを形成し、細胞形態、細胞皮質張力、ならびに機械的安定性を支えます。ACTG1により駆動されるアクチン動態は、細胞移動、細胞質分裂、膜輸送、接着結合（アドヘレンスジャンクション）の形成などの主要なプロセスを協調的に制御し、RhoファミリーGTPaseシグナル伝達やアクチン結合タンパク質ネットワークといったアクチン制御経路と統合されています。ヒト生物学においては、ACTG1機能やアクチン細胞骨格の恒常性の変化が感覚系および発生系の異常と関連しており、ストレス応答や組織形態形成における細胞骨格リモデリングの文脈で頻繁に研究されています。さらに、アクチンの構築は転写プログラムやメカノトランスダクションにも影響するため、ACTG1は細胞状態の遷移や細胞骨格依存的シグナル伝達の解明においても重要な研究対象です。

ACTG1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるACTG1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ACTG1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ACTG1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ACTG1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ACTG1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ACTG1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ACTG1の機能に不可欠なACTG1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ACTG1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ACTG1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびACTG1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ACTG1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ACTG1 HDRプラスミド（h）および ACTG1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはACTG1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のACTG1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。