Particules Lentivirales d'Activation (h) ACSL4: sc-401649-LAC

ACSL4 (acyl-CoA synthetase long-chain family member 4) est une ligase acyl-CoA humaine qui active préférentiellement les acides gras polyinsaturés tels que l’acide arachidonique, les orientant vers le remodelage des phospholipides et la biosynthèse de médiateurs lipidiques. En modulant la composition des phospholipides membranaires, ACSL4 influence la sensibilité à la ferroptose, les réponses au stress oxydant et la signalisation liée aux eicosanoïdes, reliant le métabolisme lipidique à la mort cellulaire régulée et aux programmes inflammatoires. Une activité et une expression dérégulées d’ACSL4 ont été associées à des modifications de la dynamique de la peroxydation lipidique observées dans des modèles de biologie du cancer, de neurodégénérescence et de maladies métaboliques, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des phénotypes induits par les lipides. ACSL4 est donc largement étudiée dans des voies intégrant l’activation des acides gras, le remodelage membranaire et la régulation du devenir cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales ACSL4 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ACSL4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ACSL4 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ACSL4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ACSL4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ACSL4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.