ACOX1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401690-NIC

ACOX1はアシルCoAオキシダーゼ1をコードしており、超長鎖脂肪酸のβ酸化の最初の段階を触媒するペルオキシソーム酵素のうち律速となるものです。また、副産物として過酸化水素を生成します。ペルオキシソームにおける脂質分解代謝に関与することで、ACOX1は細胞内の脂質恒常性の維持に寄与し、酸化還元制御や代謝シグナル伝達経路とも連関します。ACOX1活性の変化は、超長鎖脂肪酸の蓄積やミトコンドリア代謝への二次的影響など、ペルオキシソーム機能障害の表現型と関連づけられています。ACOX1が関与するペルオキシソームβ酸化の破綻や酸化ストレス経路の異常は、神経発達、肝代謝、炎症応答に関する研究において重要です。

ACOX1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ACOX1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ACOX1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ACOX1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ACOX1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。