ACOX1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401690-ACT

ACOX1 codifica a acil-CoA oxidase 1, a enzima limitante da velocidade da β-oxidação peroxissomal de ácidos graxos de cadeia reta, que catalisa a primeira etapa oxidativa e gera peróxido de hidrogênio. Ao controlar o catabolismo lipídico nos peroxissomos, a ACOX1 influencia o equilíbrio redox celular, a homeostase lipídica e a comunicação metabólica com a oxidação mitocondrial e com programas transcricionais regulados por PPAR. Alterações na atividade de ACOX1 podem comprometer o processamento de ácidos graxos de cadeia muito longa e a função peroxissomal, processos implicados em distúrbios peroxissomais hereditários e em fenótipos de doenças metabólicas. Em células humanas, o nível de expressão de ACOX1 é frequentemente utilizado como indicador de biogênese de peroxissomos, respostas ao estresse oxidativo e remodelamento lipídico.

ACOX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ACOX1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACOX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ACOX1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ACOX1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACOX1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ACOX1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACOX1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACOX1 em células tumorais com expressão de ACOX1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.