Plasmide CRISPR d'Activation (h) ACOX1: sc-401690-ACT

ACOX1 code l’acyl‑CoA oxydase 1, l’enzyme limitante de la β‑oxydation peroxysomale des acides gras à chaîne linéaire, qui catalyse la première étape oxydative et génère du peroxyde d’hydrogène. En contrôlant le catabolisme lipidique peroxysomal, ACOX1 influence l’équilibre rédox cellulaire, l’homéostasie lipidique et les interactions métaboliques avec l’oxydation mitochondriale et les programmes transcriptionnels régulés par les PPAR. Une activité d’ACOX1 altérée peut perturber la prise en charge des acides gras à très longue chaîne et la fonction des peroxysomes, des processus impliqués dans des maladies peroxysomales héréditaires et des phénotypes de maladies métaboliques. Dans les cellules humaines, le niveau d’expression d’ACOX1 est fréquemment utilisé comme indicateur de la biogenèse des peroxysomes, des réponses au stress oxydant et du remodelage lipidique.

ACOX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ACOX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ACOX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ACOX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ACOX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ACOX1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ACOX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ACOX1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ACOX1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ACOX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.