Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACMSD (m): sc-435223

Présentation

Acmsd code l’aminocarboxymuconate semialdéhyde décarboxylase (ACMSD), une enzyme clé de la voie de la kynurénine impliquée dans le catabolisme du tryptophane, qui détourne des intermédiaires de la formation de quinolinate et influence la biosynthèse de novo du NAD⁺. En régulant l’équilibre entre la production d’acide picolinique et d’acide quinolinique, ACMSD peut affecter le métabolisme redox cellulaire, la fonction mitochondriale et la signalisation inflammatoire liée à la détection des acides aminés. Une modification du flux au sein de la voie de la kynurénine a été associée à la neuroinflammation, au stress excitotoxique et à une dérégulation métabolique, faisant d’Acmsd une cible utile pour des études mécanistiques dans le SNC et les tissus périphériques. Dans des modèles murins, la perturbation d’Acmsd permet d’examiner comment des métabolites dérivés du tryptophane façonnent le dialogue immuno‑métabolique et l’homéostasie tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ACMSD (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Acmsd dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Acmsd, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Acmsd à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ACMSD.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Acmsd pour l'étude de la signalisation de ACMSD, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Acmsd essentiels à la fonction de ACMSD
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Acmsd pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ACMSD plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ACMSD plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Acmsd. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ACMSD plasmide HDR (m) et le ACMSD (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Acmsd pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Acmsd définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.