ACAP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405104-ACT

ACAP1 (proteína ArfGAP com domínios em coiled-coil, repetições de anquirina e domínios PH 1) codifica uma proteína ativadora de GTPase regulada por ARF6 que acopla a ligação a fosfoinositídeos a eventos de tráfego de membrana. A ACAP1 atua na reciclagem endocítica associada à clatrina, ajudando a controlar a triagem de cargas e o retorno de recetores e moléculas de adesão à membrana plasmática, influenciando assim a polaridade celular, a migração e a dinâmica de sinalização. Por meio das suas funções em endossomas de reciclagem e no tráfego ligado à actina, a ACAP1 é relevante para vias que regulam o turnover de recetores, a adesão dependente de integrinas e a remodelação da membrana em células imunitárias. A reciclagem endossomal desregulada e a atividade da rede de ARF6 têm sido implicadas na sinalização oncogénica, em fenótipos associados à invasão e em disfunções imunitárias, tornando a ACAP1 um nó útil para estudos mecanísticos da regulação dependente de tráfego.

ACAP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ACAP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACAP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ACAP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ACAP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACAP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ACAP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACAP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACAP1 em células tumorais com expressão de ACAP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.