ABCG2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416737-ACT

ABCG2 (membro 2 da subfamília G da cassete de ligação a ATP) é um transportador de efluxo da membrana plasmática que utiliza a hidrólise de ATP para exportar uma ampla gama de metabólitos endógenos e xenobióticos. É altamente expresso em tecidos de barreira e em compartimentos celulares com características de células-tronco, onde contribui para o fenótipo de “população lateral” e regula a acumulação intracelular de pequenas moléculas. A atividade do ABCG2 intersecta-se com processos relacionados à desintoxicação e ao estresse oxidativo, influenciando a homeostase celular sob desafios metabólicos e ambientais. Alterações na expressão ou na função do ABCG2 estão associadas à variabilidade na disposição de fármacos e têm sido estudadas em contextos de biologia do câncer e de proteção tecidual, nos quais o efluxo mediado por transportadores molda a sensibilidade celular a agentes de estresse químico.

ABCG2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ABCG2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ABCG2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ABCG2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ABCG2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ABCG2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ABCG2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ABCG2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ABCG2 em células tumorais com expressão de ABCG2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.