ABCG1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-418933-ACT

O gene **Abcg1** de camundongo codifica o transportador da família **ABC** (ATP-binding cassette) **ABCG1**, um regulador central da homeostase lipídica intracelular que promove o efluxo de colesterol e fosfolipídios para a HDL e ajuda a manter a composição da membrana. A atividade de ABCG1 se integra a programas transcricionais mediados por LXR/RXR e influencia a biologia de macrófagos do tipo “foam cell”, a sinalização inflamatória e o manejo de lipídios em tecidos imunes e metabólicos. Além das funções em macrófagos, ABCG1 contribui para o equilíbrio do surfactante pulmonar e para as respostas celulares ao estresse oxidativo e metabólico. Assim, a desregulação da expressão ou da função de ABCG1 é relevante para estudos de vias relacionadas à aterosclerose, inflamação metabólica e desarranjos lipídicos pulmonares em modelos murinos.

ABCG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Abcg1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ABCG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Abcg1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Abcg1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ABCG1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Abcg1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ABCG1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ABCG1 em células tumorais com expressão de Abcg1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.